唾液酸化聚糖SGs的異常表達與各種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移密切相關(guān),并且唾液酸化糖蛋白已經(jīng)廣泛用于癌癥臨床生物標記物。然而,SGs的鑒定和綜合分析異常復(fù)雜,迫切需要一種新的、有效的方法從生物樣品中捕捉SGs。

近日,中國科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所梁鑫淼和卿光焱團隊報道了一種基于席夫堿水解的新型動態(tài)共價化學(xué)策略用于精準捕捉SGs。與傳統(tǒng)的靜態(tài)親和力和不可逆的化學(xué)鍵結(jié)合策略不同,本研究采用動態(tài)共價化學(xué)策略,利用吡喃葡萄糖苷-席夫堿修飾的硅膠建立了一種高特異性、高效、溫和、可逆的SG捕獲方法,隨后,研究者詳細的講述了隱藏在席夫堿水解背后的故事,顯示了動態(tài)共價化學(xué)在糖蛋白組學(xué)和生物分子傳感中的獨特優(yōu)勢,促進了糖蛋白組學(xué)和唾液酸傳感裝置的發(fā)展,對癌癥生物標記物的發(fā)展也具有較為可觀的前景。

唾液檢測癌癥?捕捉癌癥標記物新思路

【圖文速遞】

基本原理如下:如圖1b所示,4-甲酰苯基-D-吡喃葡糖和(3-氨基丙基)-三甲氧基硅烷改性的硅膠之間進行亞胺化反應(yīng)形成吡喃葡萄糖苷-席夫堿修飾的硅膠材料(Glu-Schiff base@SiO2)。在生物樣品SGs作用下,席夫堿水解形成SG-前體胺絡(luò)合物和試劑Glu,Glu的有序自組裝能進一步促進水解反應(yīng),從而實現(xiàn)對生物樣品的高效富集。在氨水的作用下,又可以進行逆反應(yīng),從而實現(xiàn)樣品的無損回收。

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圖1 唾液酸化聚糖(SGs)的重要性和精準捕捉SGs的材料設(shè)計。a)哺乳動物細胞膜表面覆蓋濃稠的一層多糖-蛋白質(zhì)復(fù)合物,特別是富含唾液酸的聚糖在癌細胞表面高度表達。這些聚糖與血小板和內(nèi)皮細胞表面的選擇素結(jié)合使得癌細胞得以擴散或轉(zhuǎn)移。b)基于席夫堿水解反應(yīng)的唾液酸或SGs高效捕獲策略的示意圖。N-乙酰-神經(jīng)氨酸(Neu5Ac)是一種典型的唾液酸,其結(jié)構(gòu)用紅色的◆表示。

與傳統(tǒng)的以乙腈和水的混合溶液為洗脫液的糖肽洗脫方法完全不同,該方法中以Glu-Schiff?base@SiO2為柱料制備微固相萃取柱(SPE),以含1%甲酸(FA)的85%乙腈(ACN)/H2O為肽載液,含1%FA的80%ACN/H2O為洗滌液,氨水(10%NH3·H2O)為洗脫液。研究結(jié)果表明,Glu-Schiff-base@SiO2材料對模型蛋白樣品和人血清均表現(xiàn)出優(yōu)異的唾液酸化糖肽(SGP)富集選擇性。并且SGP具有較高的吸附容量和回收率,吸附容量值為120mg·g-1,明顯高于商業(yè)中的ZIC-HILIC (10 mg·g-1)?和 Sepharose (10 mg·g-1),Glu-Schiff base@SiO2回收率高達95.5%。這種特性特別適合SGPs的捕捉和分析,因此這將有助于其在唾液酸傳感、細胞表面唾液酸分析、腫瘤細胞分類和各種癌癥的早期診斷等方面的應(yīng)用。

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圖2Glu-Schiff堿@SiO2材料富集唾液酸化糖肽(SGP)。(a)基于微固相萃取的富集方法(b)從胎球蛋白:BSA摩爾比為(1:5000)的胰蛋白酶消化中獲得的富含Glu-Schiff base@SiO2的糖肽的質(zhì)譜圖(MS)。糖肽在其聚糖結(jié)構(gòu)上以紅星標記:藍色■,GlcNAc;綠色,甘露糖;黃色,半乳糖;紫色,Neu5Ac。(c)用Glu-Schiffbase@SiO2從人血清中富集糖肽。用MS對糖苷數(shù)目和相應(yīng)的富集選擇性進行了鑒定(d)從三次重復(fù)實驗中鑒定的糖肽的Venn圖。(e)ZIC-HILIC、Sepharose、NH2@SiO2、phenyl-Schiff base@SiO2和Glu-Schiff base@SiO2與標準SGP(CAS:189035-43-6)的吸附能力比較。(f)基于Glu-Schiff base@SiO2材料的富集法對兩中SGPs的回收率[m/z:983.7892(3+)、1475.0836(2+)]。
為什么Glu-Schiff?base@SiO2材料會對SGs有如此優(yōu)異的富集效果呢?為了回答這一問題,研究人員引入了兩個分子模型,Neu5Ac(SGPs的最外層分子)和4-(苯乙亞胺)甲基]苯基-D-吡喃糖苷(Schiff base A)(Glu-Schiff base@SiO2材料的核心組分)。Schiff base A緩慢水解會產(chǎn)生PEA和4-甲酰苯基β-Dglucopyranoside(B),Neu5Ac加入后會加速Schiff base A水解,并且Neu5Ac和水解產(chǎn)物之間有較強的相互作用力形成高度穩(wěn)定的PEA-Neu5Ac絡(luò)合物。更有趣的是,研究人員發(fā)現(xiàn)B在水中具有很強的自組裝能力,這將促進水解反應(yīng)并促進水解物PEA與Neu5Ac的絡(luò)合反應(yīng),所以Glu-Schiff base@SiO2材料對SGs表現(xiàn)出超強的親和力。

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Figure 3 席夫堿水解產(chǎn)生穩(wěn)定的SG-前體胺絡(luò)合物。(a)Schiff base A水解反應(yīng)的示意圖及本研究的核心問題:Schiff base A在水溶液中遇到Neu5Ac時發(fā)生了什么?(b)基于自制半制備液相色譜柱(click TE-Cys)的席夫堿水解反應(yīng)產(chǎn)物的高效液相色譜圖。(c)PEA-Neu5Ac絡(luò)合物的MS和MS/MS(c的插圖)。(d)PEA,(e)Neu5Ac和(f)PEA-Neu5Ac絡(luò)合物的13C核磁共振譜。(g)PEA-Neu5Ac絡(luò)合物的1H-13C COSY核磁共振譜(溶劑:重水,溫度:20°C)。(h)PEA和Neu5Ac之間可能的結(jié)合模式的化學(xué)結(jié)構(gòu),核磁共振譜中顯示了每個C原子和h質(zhì)子的分配。(i)通過量子化學(xué)計算(6-311g水平下的高斯密度泛函理論(DFT))獲得的PEA-Neu5Ac絡(luò)合物的可能結(jié)合模型,其中水被設(shè)置為溶劑。靜電力和氫鍵相互作用分別用不同長度的橙色和綠色虛線表示。

 

【總結(jié)】

在本文中,研究人員從材料科學(xué)的角度出發(fā),打破了傳統(tǒng)以材料化學(xué)穩(wěn)定性為前提的富集材料設(shè)計思路,采用Glu-Schiff?base@SiO2材料作為“自我犧牲”試劑發(fā)揮作用,揭示了席夫堿水解反應(yīng)的必要性,說明了動態(tài)共價化學(xué)策略在捕獲目標生物分子方面的巨大潛力。相關(guān)研究內(nèi)容以“What Is Hidden Behind Schiff Base Hydrolysis? Dynamic Covalent Chemistry for the Precise Capture of Sialylated Glycans”為題發(fā)表在JACS

全文鏈接:

https://pubs.acs.org/doi/10.1021/jacs.0c01970

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